脂肪是饲料及其原料中仅次于蛋白质的主要品质项目, 目前其含量的测定普遍使用国家标准 GB/T 6433- 1994 , 采用索氏( Soxhlet ) 抽提原理, 影响检测结果的主要因素有样品颗粒、抽提溶剂、抽提时间、天平和烘箱的准确度、抽提装置的性能、环境温度、所用器具清洁度、样品中水分含量水平、操作人员水平等。笔者在日常检测的具体操作过程, 有时遇到检测结果受某些因素影响而不稳定的现象。为探讨出现这种现象的原因, 我们就样品颗粒、抽提溶剂、抽提时间这 3 个主要影响因素对鱼粉、豆粕、大豆粉分别进行分析探讨和调控试验, 结果报道如下。

1 材料和方法
1.1 样品的采集和制备
随机选用经广州黄埔港入境的鱼粉、豆粕、大豆粉, 样品的抽取和制备按 SN/T 0800.1- 1999《进出口粮油、饲料检验抽样和制样方法》进行。
1.2 主要仪器与试剂
磨样机, KNIFETEC 1095 型; 标准筛, BS 410/1986 ; 脂肪自动测定仪, SZC-101上海纤检仪器有限公司; 烘箱, DHG-9140A; 粗天平,YP502 , 感量 0.01g ; 分析天平,
FA , 感量 0.0001g ; 所需试剂主要是分析纯乙醚和沸点范围 30~60℃ 的石油醚( 30# )。
1.3 试验方法
根据日常检验工作遇到的实际问题, 就不同样品颗粒、不同抽提溶剂、不同抽提时间, 参照现行国家标准 GB/T6433- 1994 《饲料粗脂肪测定方法》中的仪器法进行脂肪含量测定。
1.4 评判依据
按现行国家标准 GB/T 6433- 1994 《饲料粗脂肪测定方法》中对实验结果限差的规定来评价测定结果数据的有效性。该国标规定: 当脂肪含量大于或等于 10% 时, 允许相对偏差为 3% ; 当脂肪含量小于 10% 时, 允许相对偏差为 5% 。
1.5 主要计算公式
1.5.1 脂肪含量
脂肪含量( % ) = ( 抽提后铝杯恒重 - 抽提前铝杯恒重) / 风干试样重量 ×100
1.5.2 相对偏差
相对偏差 = (测量值 - 平均值) / 平均值 ×100%
2 结果和分析
2.1 不同样品颗粒大小对饲料脂肪抽提效果的影响在现行国家标准 GB/T 6433- 1994 《饲料粗脂肪测定方法》中, 脂肪成分的提取主要是通过将样品浸泡在抽提溶剂中由抽提溶剂洗涤样品来实现的。样品颗粒的大小直接影响到样品能和抽提溶剂接触的广度和深度, 这将直接影响到所测样品脂肪成分的提取(萃取)效率。通常在相同的试验条件下, 样品颗粒越小, 脂肪成分的提取( 萃取) 效率越高, 所测得样品的脂肪含量也会高一些。在日常检验工作中, 有时怀疑因样品研磨不够细致而导致检测结果偏低。本文以现行国家标准 GB/T 6433- 1994 规定的 0.45mm(40 目 ) 颗粒大小为基础, 随机选用鱼粉原样( 即未经任何磨制)和经日常研磨方式 ( KNIFETEC 1095 型磨样机,选 2s 或 5s 模式, 运转次数视样品性状而定) 制备的大豆粉、豆粕样品作为试验组。对所有实验样品分别用 1mm (18 目 ) 、 0.45mm (40 目 ) 、 0.212mm(70 目 ) 标准筛筛分检查样品颗粒大小的分布情况,
详见表 1 。对将作为参照组的样品, 如有0.45mm 筛上物的增加磨制时间, 直到全部过0.45mm 筛。然后, 对所有样品用乙醚作抽提溶剂, 浸泡 15min 、淋洗 45min 进行脂肪含量检测,结果见表 1 。
由表 1 “粒度分布”栏可以看到, 作为参照组的大豆粉、豆粕、鱼粉样品, 我们严格按现行国家标准 GB/T 6433- 1994 的规定, 制备至 100% 过0.45mm 标准筛, 对作为试验组的样品, 大豆粉、豆粕经日常研磨方式处理后 0.45mm 筛上物分别为 52% 、 41% , 其中 1.00mm 以上颗粒分别占 2% 、4% , 鱼粉样品为入境卸货原状, 未经任何研磨,0.45mm 筛上物为 36% , 其中 1.00mm 以上颗粒占5% 。从表 1 “乙醚抽提效果”栏可以看出, 无论是参照组, 还是试验组, 大豆粉、豆粕、鱼粉的每一对平行样品之间的相对偏差均远远低于现行国家标准 GB/T6433- 1994 规定的允许相对偏差, 这表明经日常研磨方式 ( KNIFETEC 1095 型磨样机, 选 2s 或 5s 模式, 运转次数视样品性状而定)制备的样品, 虽然未能达到 100% 过 0.45mm 标准筛的要求, 但两者的抽提效果在实验误差范围之内。表 1 结果提示对大豆粉、豆粕、鱼粉样品, 颗粒研磨至 1.00mm 以下, 脂肪抽提效果就可以达到现行国家标准 GB/T 6433- 1994 的规定。
2.2 不同抽提溶剂对饲料脂肪检测结果的影响

现行国家标准 GB/T 6433- 1994 《饲料粗脂肪测定方法》中规定用分析纯乙醚作为抽提溶剂。乙醚又名二乙醚, 由浓硫酸与乙醇共热至 130~140℃ 时蒸馏而制得, 沸点 34.5℃ , 相对密度0.714 , 易溶于乙醇和氯仿等, 是良好的抽提试剂。 但乙醚蒸气和空气的混合物极易爆炸, 爆炸极限为 1.85%~36.5% ( 体积)。另外, 用于脂肪抽提实验后的乙醚, 由于含有较多氧化物, 其收集、储存、回收等方面存在安全隐患。因此, 我们选用较为安全的石油醚, 沸点范围 30~60℃ , 相对密度0.63~0.66 。石油醚由天然石油或人造石油经分馏而得, 主要是戊烷和己烷等低分子量烃类的混合物, 也是无色可燃易挥发澄清液体, 不溶于水, 溶于大多数有机溶剂, 能溶解油和脂肪, 多用做溶剂或化学试剂。我们参照现行国家标准 GB/T6433- 1994 中仪器法, 分别对 3 个大豆粉、 3 个豆粕和 3 个鱼粉共 9 个样品分别用乙醚和石油醚作为抽提溶剂进行浸泡 15min 、淋洗 45min 的试验, 结果见表 2 。
由表 2 可以看到, 无论是属于植物性物质的大豆粉、豆粕样品, 还是属于动物性物质的鱼粉样品, 每一对平行样品之间的相对偏差均远远低于现行国家标准 GB/T 6433- 1994 规定的允许相对偏差。此外, 不同饲料种类的各个样品两种抽提溶剂的检测结果都非常接近, 两者的平均值之差分别为大豆粉: -0.06% 、 -0.17% 、 0.28% ,豆粕:0.30% 、 0.17% 、 0.17% , 鱼粉: 0.18% 、 0.06% 、 -0.02% 。由此可见, 用乙醚和与乙醚沸点相近的石油醚作为抽提溶剂来检测大豆粉、豆粕、鱼粉中脂肪含量的效果是一致的。事实上, 用石油醚替代乙醚作溶剂已是现代分析检测工作的趋势, 本结果“验证”了其替代的合理性。
2.3 不同浸洗时间对饲料脂肪抽提效果的影响由于现行国家标准 GB/T 6433- 1994 《饲料粗脂肪测定方法》的原理属于重量分析法, 所测得样品脂肪含量的数值与该样品在浸提前后两者的质量差值有直接联系, 相同试验条件下, 随着浸提时间的延长, 该样品在浸提前后两者的质量差值会增大, 所测得样品的脂肪含量也会高一些。在日常检验实践中, 我们有时怀疑因浸洗时间过短而导致检测结果偏低, 本文以脂肪自动测定仪 ( 2050 型)操作说明书推荐的抽提时间60min ( 其中浸泡 15min , 淋洗 45min ) 为基础, 分别增设浸泡 30min 、淋洗 45min 和浸泡 15min 、淋洗 90min 两种抽提方式, 对日常检验工作量较大的饲料用大豆粉、鱼粉以乙醚作抽提溶剂进行试验。基本实验过程的数据和计算结果见表 3 。
由表 3 可见, 随着浸泡、淋洗时间的延长, 检测结果有增加的趋势。浸泡 30min , 淋洗 45min 的检测结果与标准浸泡 15min 、淋洗 45min ) 的结果平均值之差分为: 大豆粉 0.08 , 1 号鱼粉 0.04 , 2号鱼粉 0.19 。浸泡 15min 、淋洗 90min 时检测结果与浸泡 15min 、淋洗 45min 的结果平均值之差分别为大豆粉 0.19 , 1 号鱼粉 0.19 , 2 号鱼粉 0.38 ,前者均值为 13.43%±6.18% , 明显大于后者均值12.97%±5.91% , 两者差值为 0.47% , 相对偏差为1.74% , 配对 t 检验 t=- 3.481 , P=0.018 。这说明不同抽提时间对检测结果的影响有统计学意义, 但因相对偏差 1.74% 也远低于现行国家标准 GB/T6433- 1994 规定的允许相对偏差, 实际意义不大。由 此 可 见 , 浸 泡 30min 、 淋 洗 45min 和 浸 泡15min 、淋洗 90min 与浸泡 15min 、淋洗 45min 的抽提效果, 在实验误差范围内是一致的。
3 结论和建议
本文结合笔者在日常检测的具体操作过程和检验工作实践中, 遇到检测结果受某些因素影响而有结果出入的现象, 以常用饲料原料鱼粉、豆粕、大豆粉做研究对象, 通过对样品颗粒、抽提溶剂、抽提时间这 3 个影响脂肪含量测定的主要因素分别进行分析探讨和调控试验, 初步结果表明: ( 1 ) 对大豆粉、豆粕、鱼粉样品, 颗粒研磨至1.00mm 以下, 脂肪抽提效果就可以达到现行国家标准 GB/T 6433- 1994 的规定; ( 2 ) 用乙醚和与乙醚沸点相近的石油醚作为抽提溶剂来检测大豆粉、豆粕、鱼粉中脂肪含量的效果是一致的;( 3 ) 浸泡 30min 、淋洗 45min 和浸泡 15min 、淋洗90min 与浸泡 15min 、淋洗 45min 的抽提效果, 在实验误差范围内是一致的。
在现行国家标准 GB/T 6433- 1994 《饲料粗脂肪测定方法》中, 脂肪成分的提取主要是靠有机溶剂来萃取, 萃取过程中, 除脂肪外, 还有有机酸、磷脂、脂溶性维生素、色素等也溶到萃取液中, 最终留在浸提铝杯里与脂肪一起恒重, 影响试验, 所以该国标也说明测定结果为“粗脂肪”或乙醚提取物。因此笔者建议: ( 1 )样品颗粒研磨至1.00mm 以下, 脂肪抽提效果就可以达到现行国家标准 GB/T 6433- 1994 的规定; ( 2 ) 为消除安全隐患, 可选用沸点范围为 30~60℃ 的石油醚来代替乙醚作抽提溶剂; ( 3 ) 抽提时间以脂肪自动测定仪操作说明书推荐的 60min ( 其中浸泡 15min ，淋洗 45min )为宜。